邦耀生物基因编辑实验室在基因治疗血友病领域获得突破

2016年3月10日，华东师范大学生命科学学院院长、邦耀生物首席科学家、上海市调控生物学重点实验室刘明耀教授和李大力教授课题组在国际著名学术期刊《EMBO molecular Medicine》杂志上发表了题为“CRISPR/Cas9-mediated somatic correction of a novel coagulator factor IX gene mutation ameliorates hemophilia in mouse”的文章，率先证明了通过Cas9基因编辑技术原位修复F9基因突变治疗B型血友病的可行性。

在与海南医学院附属医院以及邦耀生物基因编辑实验室的联合研究中，刘明耀、李大力团队发现了B型血友病FIX基因的新型突变Y371D，同时找到小鼠上对应的氨基酸位点Y381D，并且利用CRISPR/Cas技术构建了C57BL/6品系的小鼠重症B型血友病模型以及蛋白质序列383位移码突变Y383STOP。然后创新性的利用AAV结合CRISPR/Cas技术在Fix基因原位进行修复，对小鼠尾静脉注射腺病毒来递送Cas9、sgRNA和修复模版，成功的修复了部分小鼠肝脏细胞，极大的提高了F9Y381D血友病小鼠的凝血能力和断尾实验中的生存率。

人类的凝血过程是一个由各种凝血因子参与和共同完成的级联反应，在此反应中的任何一种因子发生突变都可能导致级联反应无法进行，最终导致凝血的过程无法完成，临床上表现为流血不止、凝血障碍、自发性出血（多发生在关节、肌肉以及软组织）等血友病的症状，其中自发性内出血尤其危险。B型血友病发病率占血友病患者总人数的25%左右。初步估计我国有血友病患者约10万人，约占世界血友病患者总数的1／4。是世界血友病人群最大的国家，所以这次对血友病研究的突破有望解决一个重大国家健康卫生问题，同时也为基因编辑技术应用于单基因遗传病的治疗提供了有力的实验支持。

刘明耀教授课题组作为国内基因编辑领域的领军科研团队，为该研究提供了坚实的基础和丰富的经验，使课题组能够更深入细致地研究B型血友病基因治疗。该团队曾是国内最先利用TALEN技术构建基因敲除小鼠的几个团队之一（Nucleic Acids Research，2013）。在CRISPR/Cas系统刚刚兴起的2013年，邦耀基因编辑实验室分别于4月和8月在国际著名期刊《Nucleic Acids Research》和《Nature Biotechnology》上发表了两篇论文描述CRISPR/Cas系统在大鼠和小鼠上成功实现了多基因敲除。并且之后又利用Cas9重组蛋白注射小鼠、大鼠胚胎并成功的实现了大片段的基因编辑，点突变和报告基因的插入（Scientific Reports，2015）。该团队在基因编辑和模式动物构建方面具有国内外领先的技术和实力，且具有强大的持续创新能力。