同一标本AFP结果差异巨大，谁真谁假？

前 言

AFP作为一种最经典的肿瘤标志物，其检测结果一直受到临床医生的重视和患者的高度关注，也是人们健康体检的一种常规检测项目，而有肝病史的人群更关心其定量测定的结果，其检测结果的稳定性和准确性与患者的利益密切相关，假阳性或假阴性结果会给临床医生和患者错误的提示，延误治疗或影响疗效判断。下面就1例工作中遇到的同一份样本，AFP前后结果差异较大的案例进行分析。

案例经过

2023.1.28，在肝癌早筛的报告审核过程中发现这样一例结果AFP＞1200ng/mL，AFP-L3%＞1200ng/mL，AFP/AFP-L3%＞10%（均大于检测上限），患者为我院中医科患者，诊断为肝积。见图1，与图2 2023.1.3号肝癌早筛结果相差较大。

图1

图2

仪器为热景C2000化学发光免疫分析仪，试剂为热景公司生产的甲胎蛋白异质体比率（AFP-L3%）测定试剂盒（简称AFP-L3%试剂），随即用热景公司生产的甲胎蛋白测定试剂盒（简称AFP试剂）进行AFP的复测，结果为60.42ng/mL，见图3。

图3

两种试剂盒的方法学均为磁微粒化学发光免疫分析法，所测得的结果相差甚大，这时查看患者其他化验结果见图4-7。希望能给签发报告有一些提示。

图4

图5

图6

图7

凭经验判断，血小板正常，血红蛋白，肝功能以及肝纤维化异常，DD危急值，认为这可能是肝硬化失代偿期或者急性重症型肝炎，加上1.3号的肝癌早筛结果，认为AFP为60.42ng/mL这一结果更准确，随即用两种试剂盒再次重测，AFP-L3%试剂结果仍然是AFP＞1200ng/mL，AFP-L3%＞1200ng/mL，AFP/AFP-L3%＞10%，AFP试剂结果为69.88ng/mL（编号Y2880图8），两种试剂检测结果还是不一致，到底哪一个才是患者的真实结果呢？

图8

案例分析

联系临床大夫询问相关病情，该患者主要病史为长期慢乙肝，B超提示肝脏有占位病变，此时之前的猜测全部推翻，考虑AFP试剂盒对AFP的测定是否存在干扰造成了一个假性低值，鉴于上述检测结果，首先考虑HOOK效应。

HOOK效应是指由于抗原抗体比例不合适而导致的假阴性或弱阳性现象，据文献报道，消除或减弱HOOK效应常用的有4种方法：（1）把一步法改为两步法；（2）往检测系统中加入更多的标记抗体；（3）计算机动态速率分析；（4）标本稀释测定法[1-3]。在这４种方法中，前三种都涉及检测系统厂家，只有标本稀释测定法是临床实验室人员可以直接采用的最高效、简便的方法。

处理过程：

将样本进行50倍稀释：AFP试剂结果为AFP>60000ng/mL；AFP-L3%试剂结果为AFP>60000ng/mL，AFP-L3>60000ng/mL，AFP-L3%>10%（编号Y2880*50）。

再次进行100倍稀释：AFP试剂结果为>120000ng/mL，AFP-L3%试剂结果为AFP>120000 ng/mL，AFP-L3>120000 ng/mLAFP-L3%>10%（编号Y2880*100）。

再次进行500倍稀释：AFP试剂结果为AFP>600000ng/mL，AFP-L3%试剂结果为AFP>600000ng/mL，AFP-L3>600000ng/mL，AFP-L3%>10%（编号Y2880*500）。

再次进行1000倍稀释（仪器最高显示稀释倍数为999）：AFP试剂结果为>1198800ng/mL，AFP-L3%试剂结果为AFP>1198800ng/mL，AFP-L3>1198800ng/mL，AFP-L3%>10%（编号Y2880*1000）。见图8

随着稀释倍数的不断增高，AFP的结果成比例不断增高，上述AFP试剂盒测定的AFP结果明显是因HOOK效应引起的弱阳性结果。经过进一步稀释后即可得出准确结果而未发生HOOK效应。在AFP试剂盒说明书中标注“当AFP浓度超过4687.5ng/mL时会出现HOOK效应。见图9”此患者如此高浓度的AFP只做原倍而不稀释，HOOK效应是避免不了的。

图9

反思：AFP-L3%试剂盒说明书中标注：“当AFP浓度和AFP-L3%浓度在6000ng/mL以下时不会出现HOOK效应”见图10，而此患者AFP以及AFP-L3%浓度显然远远超过了6000ng/mL，那么1.3号患者首次肝癌早筛的报告也是因为HOOK效应造成了一个不准确的值，联系临床大夫对1.3号的错误结果给予解释，并得到谅解。此次问题解决的一个突破点是：B超提示有占位病变，但是在与临床大夫沟通之前，这些对我们有用的信息很难知道，很容易因方法学的干扰造成结果的误报。

图10

结 论

检验科存在样本量大，看不到临床患者的病历资料以及方法学干扰等弊端，因此无法做到对每一份不正常样本进行复检，尤其是HOOK效应引起假阴性或弱阳性的结果更是容易误报，建议临床科室对有疑议的结果要及时跟检验科沟通。实验室人员应高度重视临床反馈，关注每种检测方法的局限性，切实做好质量控制，有必要时检验人员要对原始标本进行原液复测及稀释后复测，以免影响病情的诊断和治疗。

专家点评

点评人：太原市第三人民医院检验科主任陈爱英

HOOK效应对AFP的干扰是工作中较为少见的现象，本文就工作中遇到的两种试剂不相符的结果进行探讨，寻找原因，最终给临床提供准确结果，由于HOOK效应的发生具有不可预见性，避免HOOK效应一直是临床实验室人员较为棘手的问题。临床医生如能在怀疑患者发生肝癌时，或者临床症状和B超已经有明显的的提示时，应在检验申请单上提示该信息，避免因不准确的检验结果对临床诊断造成困惑，也有助于实验室人员及早发现问题。

参考文献

[1] Roy R D， Rosenmund C， Stefan M I. Cooperative binding mitigates the high-dose hook effect[J]. Bmc Systems Biology， 2017， 11(1)：74.

[2] Gao Y， Zhu Z， Xi X， et al. An aptamer-based hook-effect-recognizable three-line lateral flow biosensor for rapid detection of thrombin[J]. Biosensors & Bioelectronics， 2019， 133：177-182.

[3]陈林坤，沉稳，蔡雷鸣，等.血hCG高剂量HOOK效应1例报道及文献复习[J].检验医学与临床， 2020， 17(4)：2.